1R-1. 올바른 micropippette 사용법에 대해서 설명하라.
-micropippette의 기본적인 설명
: micropippette의 용량의 단위는 microliter 이다. 용량은 micropippette 손잡이에 붙어있는 라벨로 알 수 있다.
그림 일반적으로 많이 사용하는 네 가지
종류의 micropippette
사진에서 왼쪽으로부터 1000 microliter (이것만 파란색
1.실험 목적
- 분리한 plasmid DNA를 제한효소로 처리하고, 전기영동법과 PCR을 이용하여
DNA를 분리하고 확인하는 기술을 습득한다. 제한효소의 종류에 따른 절단 방식을
알아본다.
2. 실험 원리
1) 제한 효소 (Restriction enzyme)
(1) 제한 효소의 정의
* 제
DNA > linear DNA > open circular DNA
d. 전압이 높을수록 이동속도가 빠르다.
e. 전기장의 방향도 이동속도에 영향을 미친다.
f. Ethidium bromide는 DNA 이동속도를 15%정도 감소시킨다.
g. 전기영동 buffer의 성분과 이온강도도 electrophoresis speed에 영향을 미친다.
2) DNAloading buffer
Agarose gel의 well에 DNA를 넣어 줄 때, DNA
1.실험 목적
- 분리한 plasmid DNA를 제한효소로 처리하고, 전기영동법과 PCR을 이용하여
DNA를 분리하고 확인하는 기술을 습득한다. 제한효소의 종류에 따른 절단 방식을
알아본다.
2. 실험 원리
1) 제한 효소 (Restriction enzyme)
(1) 제한 효소의 정의
* 제
2. Method
[실험재료]
premix, template & primer, D.W, mineral oil, thermocycler(PCR기계), Seakem LE agarose, gel caster, 1×TAE, EtBr, 마이크로피펫, 1.5㎖ tube
[실험방법]
① premix가 들어있는 20㎕ tube에 template DNA 1㎕, primer 2㎕를 D.W 17㎕를 넣고 잘 섞기 위해 vortexing 해준다.
② 적당하게 centrifuge 해준다.
- vortexing 시에 위로
DNA 분리 및 정제
(1) Total cell DNA의 분리
: 다음 4 단계 과정을 거쳐 배양물로부터 total DNA를 분리하였다.
① 세포배양액 - 증식, 수확(원심분리 이용)
② 세포파괴(cell lysis) - 내용물 방출
③ DNA만 분리 - 단백질 제거(페놀 처리), RNA제거(Rnase 처리)
④ DNA 농축 - 2 vol.의 에탄올(EtOH) 처리
⑵ 세
gel electrophoresis)에 의한 유전자의 분리
a. Agarose gel전기영동 시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들로는 DNA의 분자의 크기, Agarose의 농도, DNA 형태에 따라 이동속도가 다르다. 또 전압이 높을수록 전기장의 방향, Ethidium bromide, 전기영동 buffer의 성분과 이온의 강도도 전기영동 속도에 영향을 준다.
b. DNAloadi
전기가 흐르고 있다. 그리고 그물 망 구조를 가지고 있는 agarose gel이 있다. 그래서 well에 DNA를 loading하게 되면 크기와 무게, 모양에 따라서 많이 이동할 수도, 적게 이동할 수 있다. 이 차이를 가지고 어느 band가 어떤 물질을 가지고 있는지를 확인할 수 있다.
① Agarose gel전기영동 시 DNA의 이동에 영향을
DNA를 수시간내에 어마어마하게 증폭시킬 수 있으며, 이렇게 증폭된 DNA를 다음과 같이 여러가지 실험에 이용할 수 있고, 실험 결과를 토대로 여러 의학적인 연구에 응용할 수가 있다.
2. PCR이 이용되는 실험
⑴ Probe로 사용할 목적으로 cloning된 이중가닥 DNA의 증폭
⑵ 적은 양의 mRNA로부터 특정 cDNA의 c